不同方法分离的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性和成脂分化能力的比较(1)

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     肖斌

    [摘要]目的：通过比较密度梯度离心和贴壁筛选两种方法所获MSCs的增殖活性和成脂分化能力，探索MSCs体外分离和纯化的较好方法。方法：应用密度梯度离心和贴壁筛选两种方法分离纯化骨髓MSCs，并通过MTT法检测其增殖活性，用第三代MSCs进行成脂诱导，以观察两种方法所获MSCs的成脂分化能力。结果：密度梯度离心法所获MSCs纯度高，呈纺缍形或小三角形，增殖快，约7～10天融合：贴壁筛选法分离的原代细胞中红细胞。破骨细胞等杂质细胞较多，增殖速度相对较慢，且经数次传代仍有较多杂质细胞存在，经成脂诱导后，两种方法所获MSCs表现出相似的成脂能力，油红O染色细胞计数值与光密度值比较两组无显著差异(P值>0.05)。结论：密度梯度离心法是体外分离和纯化MSCs较好的方法，所获细胞增殖活性高，与贴壁筛选法所获MSCs具有相似的成脂分化能力。

    [关键词]骨髓间充质干细胞；细胞培养；成脂分化；组织工程

    [中图分类号]Q2-06 [文献标识码]A [文章编号]1008—6455(2007)01-0021-04

    骨髓间充质干细胞(mesenchy mal stem cell，MSCs)具有来源广泛，容易获取，创伤小，无免疫排斥反应，细胞处于未分化状态，增殖能力强，易于培养和自体移植，不存在伦理、道德和法律争议问题，克服了胚胎干细胞的弊端，其所具有的独特优势在组织工程研究中具有广阔的应用前景。MSCs可以直接从自体骨髓腔抽吸或松质骨获得，可作为组织工程中构建组织的种子细胞。MSCs常用的分离方法有贴壁筛选法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选法。由于流式细胞仪分选法步骤比较繁琐，现在分离MSCs最常用的方法是贴壁筛选法和密度梯度离心法。本研究采用密度梯度离心法和贴壁法分离MSCs，并进行体外培养，通过比较所获得MSCs的细胞纯度、增殖活力及成脂能力，以寻求一种较为理想的体外分离、纯化与培养MSCs的方法。

    1 材料和方法

    1.1材料：实验动物为体重(100+20)g的2月龄雄性SD大鼠(兰州军区兰州总医院实验动物科)。MEM(Gibco BRL公司)，胎牛血清(兰州民海生物工程有限公司)，胰蛋白酶(Sigma公司)，IBMX(Sigma公司)，CO₂恒温培养箱(Heracell(文章出处：庄淑波刘毅陈克明等)