ｐ２７基因转染对增生性瘢痕成纤维细胞－胶原网收缩的影响

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     韩军涛朱雄翔王洪涛

    [摘要]目的：研究p27对增生性瘢痕成纤维细胞-胶原网收缩的影响差异，探讨p27在瘢痕形成中的作用。方法：取体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞(HTsFb)，p27基因转染HTsFb，建立成纤维细胞-胶原网模型，观察p27基因转染对p27基因转染HTsFb-胶原网收缩的影响差异。结果：p27能抑制HTsFb-胶原网收缩。结论：p27可能通过抑制瘢痕收缩来抑制瘢痕形成。

    [关键词]P27；成纤维细胞胶原网；瘢痕

    [中图分类号]R619.6 [文献标识码]A [文章编号]1008—6455(2007)01—0019-02

    细胞周期调节蛋白在正常细胞的生长和肿瘤的发生中起着重要的调控作用。细胞周期素依赖性激酶(CDKs)是细胞周期进展的主要调节因子，CDKs能够使Rb基因及其相关蛋白磷酸化，反过来又受到细胞周期素(cyclin)的水平，磷酸化和细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CKIs)的控制。作用CDK的抑制蛋白p27，已证明是潜在的肿瘤抑制因子或抑癌基因。p27主要是通过与cyclin E-CDK2复合物的相互作用，从而调节细胞从G1后期到S期。目前认为p27是TGF-β、cAMP及其他细胞外因子诱导细胞生长停滞的主要介质。成纤维细胞一胶原网系统是研究创面愈合与瘢痕挛缩较为先进的三维立体培养模型，我们以成纤维细胞-胶原网为模型，研究了抑癌基因p27转染对人增生性瘢痕成纤维细胞-胶原网收缩影响，探讨抑制瘢痕挛缩可能的机制，以期为瘢痕的防治提供新的途径。

    1 材料和方法

    1.1材料：p27-pcDNA3真核表达质粒由作者本人构建，DMEM为GIBCO公司产品，胰蛋白酶为DIBCO公司产品，新生小牛血清为上海产。

    1.2方法

    1.2.1成纤维细胞培养及脂质体介导的p27基因转染参照文献进行。

    1.2.2鼠尾胶原的提取及定量：取wistar鼠尾2根，750ml/L乙醇浸泡20min,生理盐水漂洗3次，无菌条件下抽出尾腱，溶于1ml/L醋酸溶液500ml中。4℃下搅拌48h，取上清，紫外分光光度法定量蛋白质含量为0.2g/L，用于实验。 1.2.3成纤维细胞胶原网凝胶系统的建立取对数生长期HTsFb，调整细胞浓度为3.0×10⁸/L，将细胞悬液(文章出处：董茂龙胡大海姚庆君等)